“
细胞功能实验、药物筛选时,很多人都会被小分子抑制剂的溶解所困扰,一不小心就会出现析出、沉淀等情况。溶剂选错、操作流程不规范,都会造成这些情况的发生,这样不仅会导致实验重复性差,还会造成试剂和时间的浪费。本篇以 Rapamycin, CAS:53123-88-9 为例,给大家科普小分子抑制剂科学溶解、规范配液的实操要点。
”
实验准备工作
1、确认溶剂
优先看产品说明书/官网参数,常用基础溶剂:DMSO、乙醇、ddH?O、PBS等。
2、必备试剂&耗材
无菌EP管。
移液枪、枪头。
对应溶剂:DMSO/乙醇/ ddH?O/PBS等,具体根据说明书选择。
助溶剂:Tween-80、PEG300等。
设备:天平、离心机、涡旋振荡器、超声仪、恒温金属浴。
母液溶解步骤
1
浓度计算公式
质量(mg)=浓度(mM) ×体积(mL)×分子量(g/mol) ;
举例:配制1mL 10mM Rapamycin(MW=914.18),需称取9.1418mg粉末。
2
实操流程
试剂开盖前先离心:3000–3500rpm离心30秒,把管壁、管盖附着粉末全部收集到管底;
称取粉末放入EP管;
加入溶剂(Rapamycin 溶剂为无水 DMSO),轻轻吹打溶解;
加溶剂后若液体直接澄清,即溶解完成;
若有浑浊、沉淀:涡旋30–60s→40kHz、100–150W超声1–3min → 37℃温浴5–10min,直至完全澄清。
3
注意事项
超声易机械产热,易造成小分子降解,建议冰水浴控温超声;光敏化合物全程用棕色EP管或铝箔包裹EP管避光操作。
稀释至工作浓度
01
细胞实验
逐级梯度稀释
母液→中间浓度→工作浓度,例:10mM→1mM→100μM→工作浓度。
稀释溶液
细胞培养基、PBS或对应实验缓冲液。
DMSO终浓度控制
最终DMSO浓度≤0.1%,部分耐受细胞可至 0.5%,实验必须设置DMSO空白对照组,排除溶剂本身对细胞的干扰。
耐受范围
不同溶剂,不同细胞的耐受度不同,实验前需确定溶剂在实验细胞中的耐受范围。
02
动物给药
先配制澄清的25.0mg/mL Rapamycin DMSO母液,再依次添加助溶剂,体内实验的工作液,建议现用现配。配方中溶剂百分比均为终溶液中的体积占比。
03
静脉/腹腔注射
配比:
10%DMSO+40%PEG300+5%Tween-80+45% 生理盐
以1mL工作液为例,先取100μL 25.0mg/mL母液,加入400μL PEG300混匀,再加入50μL Tween-80混匀 ,最后加入450μL 生理盐水定容。
即可得到终浓度为2.5mg/mL(2.73mM)的澄清溶液。
04
口服/腹腔注射
配比:
10%DMSO+90%(20%SBE-β-CD生理盐水)
以1mL工作液为例,取100μL 25.0mg/mL母液,加到900μL 20%的SBE-β-CD生理盐水水溶液中 。
即可得到终浓度为2.5mg/mL(2.73mM)的均匀悬浊液。
20%的SBE-β-CD生理盐水水溶液(w/v质量体积比):2gSBE-β-CD粉末定容于10mL的生理盐水中,完全溶解至澄清透明,即可得到20%的SBE-β-CD生理盐水水溶液。
05
长时间给药或给药体积较大的动物实验
配比:
10%DMSO+90%玉米油
以1mL工作液为例,先取100μL 25.0mg/mL母液,再加到900μL玉米油中混合均匀。
即可得到终浓度为2.5mg/mL(2.73mM)的澄清溶液。
注意:配好若轻微析出,可37℃短暂温浴或超声复溶。
母液正确保存
1
储存
-20℃ / -80℃ 避光密封 。
2
分装
建议按单次用量小份分装,避免反复冻融产品失效。
3
时效
常规小分子抑制剂稳定期:1–6 个月;
光敏、易降解产品建议现配现用。
常见不溶问题快速排查
Adamas-life?小分子抑制剂包装常识
大规格包装:棕色避光试剂瓶(图1)。
常规小规格包装:螺口密封EP管(图2)。
1mg/5mg微量试剂包装尖底螺口管(图3),产品在标签遮住的底部位置,这种包装能减少管壁残留,不浪费样品;开盖溶解前,先进行低速离心,将产品收集到底部后再进行后续操作。
图1
图2
图3
以上产品均可在【探索平台】及其APP和小程序上一站式采购,详情可长按识别下方二维码,咨询您身边的泰坦销售或标准品客服。
关于【探索平台】
【探索平台】是隶属于上海泰坦科技股份有限公司旗下的实验室用品一站式购物平台,自2011年上线至今,为客户提供全面的产品种类、精准的搜索查找、完善的信息介绍、便捷的购物流程、标准的配送体验,形成了科学服务行业具有代表性的一站式服务平台。2021年10月18日,【探索平台】App重磅上线,科学服务开启移动新时代。
关于泰坦科技泰坦科技(股票代码:688133.SH)是全球科学服务行业的变革者,致力于加速科研创新,服务新质产业。我们通过丰富的产品线和领先的科学服务基础设施,为生命科学、化学合成、材料科学等科研场景提供实验室整体解决方案和全生命周期服务,实现更快速、更安全、更稳定的交付。
我们构建设计、研发、制造、质控、验证一体化平台,以技术创新、应用验证助力全球创新药、半导体、新材料客户加速新品研发和产业化进程。目前,公司在上海、安庆、宜昌建成5座超级工厂,率先实现国内28座城市“次日达”送货上门服务,在亚洲、欧洲、美洲和澳洲搭建了销售与服务网络,做全球合作伙伴值得信赖的同行者。
声明丨本文如有不妥之处请联系我们。
股票
板块
用户
资讯
评论 (0)